جداسازی، شناسایی مولکولی و تعیین خصوصیات بیولومینسانس باکتریهای ویبریو استخر میگوهای پرورشی خلیج فارس

باکتریهای لومینسانس در انواع مختلفی از محیط های طبیعی یافت می شود. این باکتریها اهمیت ویژه ای از جنبه های اکولوژیکی و بیوتکنولوژی دارند. در این مطالعه سعی گردید تا حضور یا عدم حضور باکتریهای لومینسانس در حوضچه های طبیعی پرورش میگو که با آب خیلج فارس مرتبط هستند مورد بررسی قرار گرفته و خصوصیات مختلف مورفولوژیکی و بیوشیمیایی آنها مورد بررسی قرار گیرد. علاوه بر روشهای متداول میکروبیولوژیکی از ژن 16s rrna بعنوان یک ابزار سریع و دقیق برای شناسایی باکتری های لومینسانس جداشده از حوضچه های پرورش میگو در خلیج فارس استفاده گردید. همچنین از ایزوله های لومینسانس بدست آمده، ژن luxa، ژن merb و ژن ftsz استخراج گردید. نمونه برداری از دو مزرعه (9 استخر) پرورش میگو در استان بوشهر انجام شد. جداسازی و خالص سازی آنها بااستفاده از محیط کشت های آگار ویژه (tcbs و swc) انجام شد. لومینسانس آنها توسط دستگاه بیولومینومتر اندازه گیری شد. از روشهای کلاسیک میکروبیولوژیکی و بعضی از تست های بیوشیمیایی مانند: ژلاتیناز، dnase، تولید اندول و لیزین دکربوکسیلاز برای تعیین خصوصیات این باکتریها استفاده گردید. سپس dna کلونی هایی که بیشترین شدت نور را داشتند استخراج گردید و توالی ژن 16s rrna، ژن های luxa، ftsz و merb کلنی های مزبور تعیین و با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیک با داده های موجود مقایسه گردید. مشاهدات میکروسکوپی نشان داد همه ایزوله ها گرم منفی هستند. شدت نور هر سه ایزوله rul/s30000000 بود. تولید اندول، فعالیت dnase، تخمیر گلوکز، لیزین دکربوکسیلاسیون، تولید h2s و حرکت هرسه ایزوله مثبت بود. فعالیت ژلاتیناز ایزوله 1aو 1b مثبت و در ایزوله 2b منفی بود. برطبق آنالیز 16s rrna ایزوله 1a با باکتری vibrio azureus 99% همخوانی داشت در صورتیکه ایزوله 1b با باکتری vibrio herveyi 99% شبیه بود همچنین میزان تطابق توالی های ژن مزبور در ایزوله 2b با باکتری vibrio communis 99% معلوم گردید. روشهای بکاربرده شده در این تحقیق برای جداسازی باکتریهای لومینسانس کارایی لازم را دارا می باشد به طوری که می تواند الگوی مناسبی برای بررسی این میکروارگانیسم ها مهم در دیگر محیط های طبیعی ایران باشد. علاوه بر تعیین شدت نور لومینسانس، خصوصیات دیگر این باکتریها نیز برای تعیین اختلاف بین جنس و گونه باید صورت گیرد تا آماده مطالعات دیگر خصوصا بررسی های مولکولی گردد. به نظر میرسد که گونه vibrio harveyi به عنوان یک گونه اجدادی برای چندین گونه محسوب می شود که از نظر توالی 16srrna تا حدی از یکدیگر جداشده اند و تفاوت نوکلئوتیدی پیدا کرده اند. اما برای جدایی گونه های تازه جداشده از گونه مادری vibrio harveyi زمان بیشتری مورد نیاز است.